厂商 ：杭州沃腾膜工程有限公司
地址 ：浙江 杭州主营产品 ：超滤膜设备 膜分离设备 纳滤膜设备 纳滤膜 工业纯水机 实验室膜分离设备 反渗透膜设备 反渗透膜
联系电话 ：13819119128
商品详情描述
本发明涉及生物技术领域。本高温木聚糖酶的制备方法由以下步骤组成：一、粗酶液的制备：将Thermobifida halotolerans YIM 90462T以体积百分比5-10％的接种量接入液体种子培养基中，振荡培养，以体积百分比5-10％的转接于液体发酵培养基中，得粗酶液；二、用截留分子量为10KDa的超滤膜包将粗酶液的体积浓缩至原来的1/6；三、浓缩后的酶液加硫酸铵至50％饱和度，离心取沉淀，溶解在缓冲液中；四、将所得液离心取上清液，加到pH8.0、0.3M硫酸铵的Tris-HCl缓冲液平衡好的Butyl-Sepharose层析柱；五、将所得液离心取上清液，加到pH8.0、0.3M硫酸铵的Tris-HCl缓冲液平衡好的Phenyl-Sepharose层析柱，用无硫酸铵pH8.0的Tris-HCl缓冲液洗脱；六、加到pH8.0的Tris-HCl缓冲液平衡好的Q-Sepharose层析柱，将洗脱峰按保留时间的先后收集，保留有木聚糖酶活性的部分。最终获得酶活活力为573U/ml，纯化收率为9％。
1、一种高温木聚糖酶的制备方法，其特征在于由以下步骤组成： 一、粗酶液的制备：将Thermobifida halotolerans YIM 90462T以5-10％的体积百分比的接种量接入液体种子培养基中，在37～45℃的条件下振荡培养至指数生长期，将处于指数生长期的菌液以5-10％的体积百分比的接种量转接于液体发酵培养基中，在37～45℃培养至稳定期初期，将发酵液离心，取上清液，滤纸过滤，得粗酶液； 二、用截留分子量为10KDa的超滤膜包将粗酶液的体积浓缩至原来的1/6； 三、浓缩后的酶液加硫酸铵至30％饱和度，离心取上清液，继续加硫酸铵至50％饱和度，离心取沉淀，溶解在pH8.0、0.3M硫酸铵的Tris-HCl缓冲液中； 四、将步骤(三)所得液离心取上清液，加到pH8.0、0.3M硫酸铵的Tris-HCl缓冲液平衡好的Butyl-Sepharose层析柱，将透过峰按保留时间的先后分别收集，直至缓冲液流过8-10个层析柱体积，保留有木聚糖酶活性的透过峰酶液部分； 五、将步骤(四)所得液离心取上清液，加到pH8.0、0.3M硫酸铵的Tris-HCl缓冲液平衡好的Phenyl-Sepharose层析柱，用无硫酸铵pH8.0的Tris-HCl缓冲液洗脱，收集所有洗脱峰组分； 六、将步骤(五)所得液离心取上清液，加到pH8.0的Tris-HCl缓冲液平衡好的Q-Sepharose层析柱，用含NaClpH8.0的Tris-HCl缓冲液洗脱，首先使洗脱液电导达到30mS/cm，将洗脱峰按保留时间的先后收集，直至缓冲液流过5-10个层析柱体积，保留有木聚糖酶活性的部分，即为本发明产品。
相关产品推荐
