circRNA pull down技术原理 目前，circRNA pull down技术绝大部分是基于接口序列设计探针捕获circRNA及其结合蛋白。由于受限于接口处序列特征，很多circRNA无法设计出理想的探针，追踪导致实验失败。 我司开发了一种新型的circRNA pull down方法，通过构建circRNA过表达载体，使circRNA连上一段16nt的短RNA序列标签（命名为F2），该标签与其特异性配体具有很强的亲和力，因此可利用该系统高笑调取靶RNA序列及其结合蛋白。追踪通过western blot或LC-MS/MS实验检测洗脱液中靶RNA的潜在结合蛋白，还可通过qPCR实验检测能够结合靶circRNA的miRNA。 凭借10多年的 RNA 研究经验，辉骏生物已掌握显进的 circRNA pull-down 技术，帮助您识别 miRNA/RBP 和 circRNA 之间的相互作用。每个项目都是完全定制的，以满足您的科学需求，我们经验丰富的团队可以为任何个人要求提供灵活的解决方案，以更快的周转时间和更低的价格向客户保证可靠和有效的研究服务。如果您对circRNA pull-down有任何实验问题，请随时与我们联系！ 添加技术员微信沟通实验 circRNA pull-down技术实验流程 circRNA pull down技术实验.bmp 应用领域 coip技术服务.bmp circRNA pull down应用背景 环状RNA（circRNA）是单链共价闭合的RNA分子，广泛存在于各物种中。据报道，circRNA可作为转录调控因子、microRNA海绵和蛋白翻译模板发挥生物学功能， 除此之外，circRNA还可以结合蛋白质来发挥作用，如： 1 与两种蛋白均相互作用，促进或解离它们之间的相互作用。 2 与一种蛋白相互作用，促进或解离其与另一种蛋白的相互作用。 3 与一种蛋白（如转录因子或酶）相互作用，促进或抑制其与靶DNA序列的结合。 4 与一种蛋白（如调控mRNA剪接、稳定和翻译的RNA结合蛋白）相互作用，促进或抑制其与其他RNA的结合。 5 与一种蛋白相互作用，影响它的胞内运输和定位（如核质转运等），进而影响该蛋白的功能。 以上这些作用模式又不是相互独立的，而是可能存在重叠。 由于蛋白质是几乎所有生命活动的直接效应分子，因此研究circRNA与蛋白的相互作用极大地拓展了我们对circRNA功能的认知。 circRNA pull down研究案例-客户文章解析 circRNA pull down研究案例 circRHOT1通过鸡活NR2F6促进肝细胞癌进程 研究背景 利用在线数据库对肝细胞癌(HCC)组织和癌旁组织的circRNA表达水平分析显示，circRHOT1是在HCC中上调很明显的一种保守性的circRNA，因此作者以circRHOT1为对象研究了其在HCC中的作用机制。 研究路线 1Northern印迹、qRT-PCR、原位杂交等实验确认了circRHOT1在HCC组织中高表达 2体内和体外实验证明circRHOT1促进HCC增殖、迁移和侵袭 3RNA-seq等技术分析了circRHOT1缺失后的差异表达基因，其中NR2F6下调只多 4CHIRP实验发现circRHOT1富集在NR2F6启动子转录起始位点 5ChIP-qPCR等实验显示敲除circRHOT1影响了NR2F6启动子转录起始位点组蛋白修饰，且RNA聚合酶II不能再结合该启动子，circRHOT1促进NR2F6转录 6cicrRNA pull down结合质谱实验发现TP60是circRHOT1的潜在结台蛋白, cicrRNA pull down WB、 RIP-qPCR等实验确定了这一结果 7ChIP和基因表达实验表明circRHOT1对PIP60介导的NR2F6表达至关重要 8表达和功能检测发现NR2F6在中瘤组织中上调，且促进HCC增殖、迁移和侵袭，circRHOT1通过鸡活NR2F6促进HCC进程 研究结论 circRHOT1通过募集TIP60蛋白到NR2F6启动子来促进其表达，进而促进HCC进程。circRHOT1和NR2F6是HCC预后的潜在生物标志物，但由于在HCC患者中抑制circRHOT1较为困难，因此药理学上抑制NR2F6可能更有希望。 客户文献 Wang L.Y. Circular RNA circRHOT1 promotes hepatocellular carcinoma progression by initiation of NR2F6 expression. Molecular Cancer. 2019. (IF= 27.401).